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這是目前新冠病毒核酸檢測(cè)最常用的方法。 但下列因素可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)誤差： 保存不當(dāng)或未及時(shí)送檢：RNA病毒很容易降解，因此，獲得患者樣本后，需要規(guī)范地保存，并盡快進(jìn)行檢測(cè)。 否則，很可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。 結(jié)果解讀錯(cuò)誤：目前批準(zhǔn)的檢測(cè)產(chǎn)品都是根據(jù)新型冠狀病毒基因組中開放讀碼框1a/b、包膜蛋白和核衣殼蛋白進(jìn)行選擇。 但不同產(chǎn)品的檢測(cè)引物、探針設(shè)計(jì)存在不同，有單靶區(qū)段、雙靶區(qū)段、三靶區(qū)段的檢測(cè)和判讀差別。 因此，如果沒有嚴(yán)格按照不同的說明書進(jìn)行判讀，有可能導(dǎo)致結(jié)果判斷錯(cuò)誤。 2.聯(lián)合探針錨定聚合測(cè)序法 這種檢測(cè)主要是用專門的儀器檢測(cè)測(cè)序載片上DNA納米球攜帶的基因序列。 這種檢測(cè)的靈敏度高，不容易漏診，但結(jié)果也容易受多種因素的影響而不準(zhǔn)，包括：
最常見的檢測(cè)新型冠狀病毒特異性核酸序列的方法是熒光定量PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）。 由于新型冠狀病毒是RNA病毒，試劑盒檢測(cè)基本都采用反轉(zhuǎn)錄加實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（RT-PCR），擴(kuò)增病原體的核酸 (RNA) ，同時(shí)通過熒光探針實(shí)時(shí)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。 在PCR反應(yīng)體系中，包含一對(duì)特異性引物以及一個(gè)Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標(biāo)記了報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)。 探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；如反應(yīng)體系存在靶序列，PCR反應(yīng)時(shí)探針與模板結(jié)合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，發(fā)出熒光。 每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子產(chǎn)生。
再次，N 基因在新冠病毒的核酸序列中保守程度不及ORF1ab,故還可能 存在少數(shù)樣本由于其他冠狀病毒等的核酸序列與其有交叉，導(dǎo)致N 基因擴(kuò)增陽性而ORF1ab 陰性。 6、結(jié)論 綜上所述，目前新冠病毒所致疾病其病理過程及臨床病程還未完全闡明，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)路徑未 標(biāo)準(zhǔn)化，加上其核酸檢測(cè)試劑盒研發(fā)時(shí)間緊迫，沒有足夠的評(píng)估及大樣本的臨床驗(yàn)證，檢測(cè) 效果良莠不齊，故對(duì)于臨床上新冠病毒核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性或單通道陽性的樣本均需要謹(jǐn)慎 對(duì)待，考慮到各環(huán)節(jié)中可能造成結(jié)果不準(zhǔn)確的影響因素。
此外，核酸檢測(cè)可以在感染的各個(gè)時(shí)期進(jìn)行檢測(cè)，但蛋白的檢測(cè)則比較有局限性，要在感染7天后或是出現(xiàn)癥狀3-4天才能比較準(zhǔn)確的反映感染情況。 兩種檢測(cè)方法，在樣品制備、樣品類型、設(shè)備要求以及專業(yè)要求和成本上也存在著差異。